產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），專用于定量檢測(cè)大鼠血清、血漿、組織勻漿及細(xì)胞上清液中的 TNF-α 蛋白濃度。檢測(cè)范圍覆蓋 0.313-20 ng/mL，靈敏度達(dá) 0.16 ng/mL，適用于炎癥反應(yīng)、免疫調(diào)控、腫瘤微環(huán)境及自身免疫病研究等領(lǐng)域。
產(chǎn)品名稱：大鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)elisa試劑盒
英文名稱：TNF-α ELISA Kit
產(chǎn)品規(guī)格：48T/96T
產(chǎn)品貨號(hào)：CS-5212E
檢測(cè)原理：
大鼠腫瘤壞死因子 α(TNF-α) elisa 試劑盒的原理是?雙抗體夾心法?，通過(guò)固相載體捕獲抗原，再用酶標(biāo)記的檢測(cè)抗體進(jìn)行識(shí)別，最后通過(guò)底物顯色反應(yīng)來(lái)定量檢測(cè)。
?固相化?：微孔板預(yù)先包被抗大鼠 TNF-α 抗體。
?結(jié)合?：加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，TNF-α 被固相抗體捕獲。
?檢測(cè)?：加入生物su化的抗大鼠 TNF-α 抗體和 HRP 標(biāo)記的親和素，形成 "抗體 - 抗原 - 酶標(biāo)抗體" 復(fù)合物。
?顯色?：加入 TMB 底物，被 HRP 催化后由藍(lán)色變?yōu)辄S色。
?測(cè)定?：用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)測(cè)定吸光度 (OD 值)，濃度與 OD 值成正比。
實(shí)驗(yàn)步驟?：
?試劑準(zhǔn)備?：將試劑盒平衡至室溫(20-25℃)，洗滌緩沖液按1:19稀釋。標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋至所需濃度。
?加樣?：每孔加入100μL標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，37℃孵育90分鐘。
?洗滌?：棄去液體，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后甩干，重復(fù)5次。
?加檢測(cè)抗體?：每孔加入100μL檢測(cè)抗體-HRP，37℃孵育60分鐘。
?洗滌?：同步驟3。
?顯色?：每孔加入90μL TMB底物A+B混合液，37℃避光孵育15分鐘。
?終止?：每孔加入50μL終止液，立即搖勻（顏色由藍(lán)變黃）。
?檢測(cè)?：450nm波長(zhǎng)測(cè)定吸光度(OD值)，15分鐘內(nèi)完成。
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操作步驟?：
?1、試劑與樣本準(zhǔn)備?：
將試劑盒平衡至室溫（20-25℃），按說(shuō)明書稀釋洗滌緩沖液（通常1:19）。
?標(biāo)準(zhǔn)品?：用梯度稀釋至0.313、0.625、1.25、2.5、5、10、20 ng/mL系列濃度。
?樣本?：血清、血漿或組織勻漿上清。若t-PA濃度高，可按說(shuō)明書（如1:10）稀釋。
?2、加樣與孵育?：
每孔加入100μL標(biāo)準(zhǔn)品或樣本。
輕輕振蕩混勻，避免觸碰孔壁。
37℃孵育90分鐘（部分試劑盒可能為120分鐘，需以說(shuō)明書為準(zhǔn)）。
?3、洗滌?：
棄去孔內(nèi)液體，用洗滌緩沖液加滿每孔，靜置30秒后甩干，重復(fù)5-6次。
4?、加檢測(cè)抗體與孵育?：
每孔加入100μL化抗豬t-PA檢測(cè)抗體。
37℃孵育60分鐘。
5?、再次洗滌?：
同步驟3，洗去未結(jié)合抗體。
6?、顯色?：
每孔加入90-100μL TMB底物混合液（A液+B液）。
37℃避光孵育10-15分鐘。
?7、終止與測(cè)定?：
每孔加入50μL終止液，立即混勻（顏色由藍(lán)變黃）。
在加終止液后15分鐘內(nèi)，用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔吸光度（OD值）。
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