產品簡介：
本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯免疫吸附法（ELISA），專用于定量檢測大鼠血清、血漿、組織勻漿及細胞上清液中的血管內皮細胞生長因子（VEGF）蛋白濃度。檢測范圍覆蓋0.313-20 ng/mL，靈敏度達0.16 ng/mL，適用于血管生成、腫瘤發展、缺血損傷修復及心血管疾病相關研究等領域。
產品名稱：大鼠血管內皮細胞生長因子elisa試劑盒
英文名稱：VEGF ELISA Kit
產品規格：48T/96T
產品貨號：CS-5362E
檢測原理：
大鼠血管內皮細胞生長因子(VEGF)elisa試劑盒的原理是雙抗體夾心法，通過固相載體捕獲抗原，再用酶標記的檢測抗體進行識別，最后通過底物顯色反應來定量檢測。
固相化：微孔板預先包被抗大鼠VEGF抗體。
結合：加入標準品或樣本，VEGF被固相抗體捕獲。
檢測：加入生物su化的抗大鼠VEGF抗體和HRP標記的親和素，形成"抗體-抗原-酶標抗體"復合物。
顯色：加入TMB底物，被HRP催化后由藍色變為黃色。
測定：用酶標儀在450nm波長測定吸光度(OD值)，濃度與OD值成正比。
實驗步驟?：
?試劑準備?：將試劑盒平衡至室溫(20-25℃)，洗滌緩沖液按1:19稀釋。標準品梯度稀釋至所需濃度。
?加樣?：每孔加入100μL標準品或樣本，37℃孵育90分鐘。
?洗滌?：棄去液體，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后甩干，重復5次。
?加檢測抗體?：每孔加入100μL檢測抗體-HRP，37℃孵育60分鐘。
?洗滌?：同步驟3。
?顯色?：每孔加入90μL TMB底物A+B混合液，37℃避光孵育15分鐘。
?終止?：每孔加入50μL終止液，立即搖勻（顏色由藍變黃）。
?檢測?：450nm波長測定吸光度(OD值)，15分鐘內完成。
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操作步驟?：
1.試劑準備
將試劑盒平衡至室溫（20-25℃），濃縮洗滌液按 1:20 稀釋備用。
標準品按說明書進行梯度稀釋，配制系列濃度標準曲線溶液。
2.實驗流程
加樣：設置空白孔、標準孔、待測樣品孔，空白孔僅加稀釋液，其余孔分別加入標準品或待測樣品，37℃孵育。
加酶標抗體：除空白孔外，每孔加入酶標抗體，輕輕混勻，37℃避光孵育。
洗滌：棄去孔內液體，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后甩干，重復洗滌 4-5 次，最后拍干殘留液體。
顯色：每孔加入 TMB 顯色液，37℃避光孵育，孔內呈現藍色。
終止：每孔加入終止液，混勻后顏色由藍色轉為黃色。
檢測：在 450nm 波長下測定各孔 OD 值，15 分鐘內完成讀數。
3.關鍵提示
實驗全程嚴格控溫，孵育時使用封板膜避免蒸發。
洗滌需充分，否則易造成高背景、結果偏差。
顯色液需避光，終止順序與加樣順序保持一致，確保充分混勻。
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