產品簡介:

本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯免疫吸附法(ELISA),專用于定量檢測小鼠血清、血漿、組織勻漿及細胞外基質提取物中的 Ⅳ 型膠原(Col Ⅳ)蛋白濃度。檢測范圍覆蓋 0.313-20 ng/mL,靈敏度達 0.16 ng/mL,適用于基底膜重構、腫瘤侵襲、肝纖維化及腎病研究等領域。
產品名稱:小鼠Ⅳ型膠原(Col Ⅳ)elisa試劑盒
英文名稱:Col Ⅳ ELISA Kit
產品規格:48T/96T
產品貨號:CS-1407E
檢測原理:

小鼠 Ⅳ 型膠原 (Col Ⅳ) elisa 試劑盒的原理是雙抗體夾心法,通過固相載體捕獲抗原,再用酶標記的檢測抗體進行識別,最后通過底物顯色反應來定量檢測。
固相化:微孔板預先包被抗小鼠 Col Ⅳ 抗體。
結合:加入標準品或樣本,Col Ⅳ 被固相抗體捕獲。
檢測:加入生物su化的抗小鼠 Col Ⅳ 抗體和 HRP 標記的親和素,形成 "抗體 - 抗原 - 酶標抗體" 復合物。
顯色:加入 TMB 底物,被 HRP 催化后由藍色變為黃色。
測定:用酶標儀在 450nm 波長測定吸光度 (OD 值),濃度與 OD 值成正比。
實驗步驟?:

?試劑準備?:將試劑盒平衡至室溫(20-25℃),洗滌緩沖液按1:19稀釋。標準品梯度稀釋至所需濃度。
?加樣?:每孔加入100μL標準品或樣本,37℃孵育90分鐘。
?洗滌?:棄去液體,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后甩干,重復5次。
?加檢測抗體?:每孔加入100μL檢測抗體-HRP,37℃孵育60分鐘。
?洗滌?:同步驟3。
?顯色?:每孔加入90μL TMB底物A+B混合液,37℃避光孵育15分鐘。
?終止?:每孔加入50μL終止液,立即搖勻(顏色由藍變黃)。
?檢測?:450nm波長測定吸光度(OD值),15分鐘內完成。
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關鍵實操技巧:

1.加樣技巧
一次性換新槍頭,垂直貼孔壁低位加液;避免氣泡、飛濺交叉污染;整板加樣速度均勻統一。
2.溫育控溫
須37℃恒溫、封板膜嚴實防蒸發冷凝;時間嚴格卡死,過長背景高、過短信號低。
3.洗板核心
每孔注滿不溢出,浸泡≥30 s;拍干用無塵吸水紙,杜絕殘留;洗板不足直接高背景、假陽性。
4.樣本規范
杜溶血、脂濁、污染樣本;禁止反復凍融;嚴禁含 NaN?抑制 HRP 活性;濃度超標只用試劑盒配套稀釋液。
5.顯色與讀數
全避光;整板顯色時長一致;加終止液立刻讀數,放置越久數值漂移越大。
6.基礎質控
樣本、標準均做復孔;室溫潔凈避光操作;試劑分裝取用,減少反復開蓋失效。